La chromatographie éclair sur colonne est un type de séparation chimique utilisé pour purifier les mélanges chimiques. Elle est également appelée purification éclair en raison de son utilisation comme procédé de purification. On la connaît aussi sous le nom de chromatographie moyenne pression.
Il s'agit d'un procédé de purification spécialement conçu pour une séparation rapide. Comparée à la chromatographie par gravité, lente et inefficace, la chromatographie éclair utilise la pression de l'air pour une séparation plus rapide et plus efficace. Cette approche diffère de la technique classique sur colonne par l'utilisation de particules de gel de silice légèrement plus petites ainsi que de gaz comprimé à une pression comprise entre 50 et 200 livres par pouce carré.
Les colonnes de chromatographie éclair sont couramment utilisées pour les séparations chimiques et sont constituées de cartouches en plastique pré-remplies contenant des particules de gel de silice de 40 à 60 mm.
Clark Still a été le premier à présenter la chromatographie éclair il y a plus de 40 ans, mais son développement n'en était qu'à ses débuts, car ce nouveau procédé était ardu et risquait de briser la colonne de verre. Cependant, dès 1994, les cartouches en plastique jetables ont permis de réduire le temps de préparation, d'améliorer la répétabilité et de raccourcir le temps de séparation.
La chromatographie flash est couramment utilisée pour la séparation de molécules chimiques étroitement apparentées. Dans l'industrie pharmaceutique, elle permet de purifier des peptides, des antibiotiques et d'autres intermédiaires chimiques pour la découverte et le développement de médicaments. Elle permet également de séparer des composés naturels tels que les tocophérols, les alcaloïdes, les xanthones, les flavonoïdes et les cannabinoïdes.
Optimisation de la chromatographie flash :
Plusieurs facteurs peuvent être ajustés pour obtenir les meilleurs résultats en chromatographie flash. Le choix de la phase stationnaire est un facteur important. Elle doit être choisie en fonction des caractéristiques physico-chimiques des composés à séparer, telles que la polarité, la taille et les groupes fonctionnels. Le gel de silice est une phase stationnaire populaire pour la chromatographie flash, car il convient à une grande variété de produits chimiques. La phase stationnaire C18 en phase inverse, hydrophobe, est utilisée pour les molécules présentant des caractéristiques hydrophobes plus élevées. D'autres phases stationnaires, telles que les colonnes C8, C4 et en phase normale, peuvent être utilisées en fonction des besoins de séparation.
Le choix de la phase mobile est également crucial en chromatographie flash. La phase mobile doit être optimisée pour obtenir une bonne séparation des composants du mélange d'échantillons. Elle doit être compatible avec la phase stationnaire et le mélange d'échantillons, et les solvants doivent être d'une grande pureté pour éviter la contamination des fractions purifiées. Une approche courante consiste à commencer avec une phase mobile plus faible et à augmenter progressivement sa concentration au cours de la séparation.
La chromatographie flash est un type de chromatographie liquide et n'utilise généralement pas la pression d'air pour éluer les composants. Elle repose plutôt sur le flux contrôlé de la phase mobile liquide à travers la colonne pour transporter les composants de l'échantillon et faciliter leur séparation sur la phase stationnaire.
La phase mobile est généralement pompée à travers la colonne à l'aide d'un dispositif de distribution de solvant, tel qu'une pompe de chromatographie liquide haute performance (HPLC) ou une pompe à seringue. Le débit de la phase mobile peut être ajusté pour gérer le temps d'élution et l'efficacité de la séparation. La phase mobile est soigneusement élaborée pour répondre aux besoins spécifiques de la séparation, tels que la polarité et la solubilité des composants de l'échantillon et de la phase stationnaire.
• Composés polaires : 100 % d'acétate d'éthyle ou 5 % de méthanol/dichlorométhane
• Composés normaux : 10-50 % d'acétate d'éthyle/hexane
• Composés apolaires : 5 % d'acétate d'éthyle/hexane, 5 % d'éther/hexane, 100 % d'hexane